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基因与健康 | 常用的基因检测方法有哪些,一代测序的优势!

基因与健康

 

常用的基因检测方法有哪些,一代测序的优势
(三博基因体检使用的技术与仪器和其他公司的区别)
 
基因检测的常用方法主要有:一代测序法、荧光定量 PCR Taqman 探针法、普通PCR法、质谱法、芯片法、二代测序法
一代测序法(Sanger法):
是美国基因科学家Sanger,于1977年建立,他本人也因此而获得了诺贝尔奖。该技术至今已用三十八年,现在已相当成熟完善。人类基因组计划的测序工作就是使用该项技术完成的,现在最好的仪器是美国ABI公司的最新3730型全自动遗传分析仪,是经过国际和国家认证的仪器,可重复性达到100%,是亲子鉴定和法医鉴定的专用仪器。该方法是目前基因检测的国际金标准。我国一代测序技术起步较晚,大概是2000年开始,但发展迅速现在以达到国际水平。
一代测序的优点:
    1、精准:流程细致,污染现象低,质量可控可视程度高,假阳性假阴性结果极低。
    A、由于没有建库环节,所以微量样品不会任意扩大,从而产生假阳性结果(与二代测序比);
    B、一代测序首先要做PCR有限扩增,然后切胶回收主带,此过程不容易污染,即使有少量污染扩增出的杂带,切胶回收可以有效分离(与二代测序、荧光定量PCR Taqman探针法比);
    C、一代测序是建立在目的基因精确物理定位基础上的测序,得到的结果是连续的、可视的、真实的长片段序列(而不是01的信号),所以出来的数据不会张冠李戴,即使读错了结果,也可以从读取的峰图序列中看出(与荧光定量 PCR Taqman 探针法、普通PCR法、质谱法、芯片法、二代测序法等方法比);
    D、基因突变可分为碱基置换、颠换、缺失和插入4种,一代测序法对于任何一种突变都可以清楚读出,而无需提前预测、预置模版造成误断结果。(与荧光定量PCR Taqman探针法、普通PCR法、芯片法、质谱法等方法比);
E、分子生物学实验经常会出现实验失败不出数据现象(其他方法判断是阴性的),对于一代测序,如果琼脂糖凝胶电泳之前和电泳过程中,任何工序不理想,都无法进行下一道工序,也就无法拿到序列峰图,这种情况必须重新实验,这个概率至少是20%。一代测序绝不会当阴性结果出报告。(与荧光定量PCR Taqman探针法、普通PCR法、芯片法比)。
一代测序是目前所有基因检测的国际金标准,是包括荧光定量PCR Taqman探针法、普通PCR法、芯片法、二代测序法、质谱法等方法的唯一验证和标准。科研领域发表基因检测相关文章,必须有一代测序验证报告予以支持。
2、可进行个性化位点检测,客户可以任意选择单项检测,一代测序个性化小套餐基因检测有价格优势;
3、法医鉴定、亲子鉴定、医学用药检测、医学疾病确诊、科研等高质量基因检测,一代测序是必须或唯一的选择;
4、一代测序是基因检测的贵族消费,我国一代测序在十几年发展过程中科研领域发挥了巨大的作用,在亲子鉴定和法医鉴定中也发挥了无以比拟的作用。在医学和健康管理领域应发挥更大的作用。
缺点
1、通量小,成本高,大套餐基因检测的成本是芯片或高通量二代测序的100倍;
2、需要样品量大,胎儿基因检测不能用母体的外周血,必须要用羊水。
 
荧光定量 PCR Taqman 探针法:
准确性较好,适合于大量样本、少量位点,价格贵,缺点是不能读出序列,不太直观,是三博远志公司辅助使用的检测方法。
质谱法:
准确性较好,缺点只能读出质量数据,不能读出序列,对于缺失和插入突变无法读出,但这种突变更加可怕,适合于大量样本、多位点(最多能检测25个位点),所以可能会出现少量假阳性和假阴性,北京三博远志公司不使用该检测方法。
二代测序和芯片法:
优点:1、需要样品量少,极微量样品建库无限倍扩大测序,可以用母体的外周血,检测胎儿极微量的DNA2、成本低廉多人份样品放到一起检测,适合于超多位点,大量样品检测和科研参考,每个样本做几百个位点和做几千个位点的检测成本相差无几,最大优点是成本低廉,一个位点的价格只相当于一代测序价格的1%
缺点:1、准确性低,可重复性不高,出来的大量数据,可信度不高,所以极易出现假阳性和假阴性,从而误导被检测者(原因参考一代测序论述)。
结论:二代测序和芯片法基因检测产品和技术有待成熟,只能作为研究参考,不能用到人类基因检测或其他任何医学用途,包括产前筛查。这也是为什么国家甚至美国FDA不予基因芯片检测临床认证的原因。20131122日,美国FDA发表布公开邮件,叫停用芯片法做基因检测的美国23andme公司。我国CFDA也多次叫停二代测序和芯片法基因检测。北京三博远志公司不使用该检测方法。
一代和二代测序及芯片的关系有人说:“一代测序被淘汰了,被二代测序和芯片取代了”。事实是三博远志公司经常承接二代测序和芯片的科研验证项目,所以二代测序和芯片离不开一代测序,同时三博远志公司经常承接二代测序和芯片没有做出的、和结论错误的课题,有客户反应:“二代测序和芯片测完了后,根本不是预期的结果,把植物测成动物或细菌,没办法还得找一代测序重头再来”。你说这样不成熟的技术怎么可以取代一代呢?
一代测序几十年内或许永远不会被取代,因为它是金标准,其他方法做得准不准是用它来验证的。

一代测序个性化检测是任何方法不能取代的,医学检测很多都是不需要高通量检测的,特别是我们国现阶段在一代测序还没有充分应用的情况下,二代还不完善、不规范,国际上包括仪器生产国,技术发明国都没有一个国家认证通过的情况下,追求所谓的“高、大、上”,盲目发展所谓的“高科技”是浮躁的表现。医学检测人命关天,二代测序和芯片大量发展是不负责任的做法。

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